96孔/盒慶大霉素快檢試劑盒

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北京智云達科技股份有限公司
18元（具體成交價以合同協議為準）
2020-08-11 17:33:05
北京市
北京
10401
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【簡單介紹】

慶大霉素快檢試劑盒
包含EIA測試所需試劑和標準品，可進行96樣測試，用于牛奶、組織、血清、尿樣、蛋類、蜂蜜和飼料樣品中中慶大霉素的篩檢。

【詳細說明】

品牌	其他品牌	是否進口	否
型號	ZYD

慶大霉素快檢試劑盒

使用說明書

1、原理
微孔板用羊抗兔抗體IgG包被。特異性抗體（兔抗慶大霉素），慶大霉素標記的酶（酶結合物）和慶大霉素標準品或應聘被加入到微孔后，特異性抗體被牢固地集合在板條上的羊抗兔抗體IgG上，同時，游離的慶大霉素（在標準溶液或樣品中）和酶結合物與特異性抗體競爭性結合。孵育后，在洗滌步驟中除去非結合（酶標記）試劑。加入色原底物（四甲基聯苯胺），結合的酶結合物可將無色的色原轉化成為有色色產物。加入硫酸，終止底物反映，在450nm波長檢測吸光值，與樣品中的慶大霉素濃度成反比。
2、產品簡介
本試劑盒包含EIA測試所需試劑和標準品，可進行96樣測試，用于牛奶、組織、血清、尿樣、蛋類、蜂蜜和飼料樣品中中慶大霉素的篩檢。
慶大霉素是一種氨基糖苷類抗生素。氨基糖苷類抗生素引起人類和動物前庭功能障礙和耳聽力損害。氨基糖苷類抗生素具有抗細菌及抗真菌作用，可用于治療革蘭氏陰性菌引起的嚴重感染，因此仍在廣泛使用。但氨基糖苷類抗生素的治療劑量及中毒劑量較為接近，其使用劑量必須收到監控。人類在飼養過程中為防止奶牛間疾病的傳染、避免禽類消化器官和呼吸道疾病的爆發有意或無意使用的氨基糖苷類抗生素從而在動物器官中產生了氨基糖苷類抗生素的殘留。
3、靈敏度和交叉反應
交叉反應
慶大霉素 100% 紫蘇霉素 20% 妥布霉素 <0.1%
新霉素 <0.1% 卡那霉素 <0.1% 林可霉素 <0.5%
靈敏度：測試曲線線性范圍0.1～-8.1ng/ml

慶大霉素檢測試劑盒檢測下限：
樣品處理方法檢測下限
牛奶脫脂稀釋 2ppb
組織三氯yi酸提取 3ppb
血清緩沖液稀釋 2 ppb
蛋類緩沖液稀釋 1 ppb
蜂蜜（稀釋法）緩沖液稀釋 3 ppb
蜂蜜（抽提法）固相抽提 0.5 ppb
尿樣緩沖液稀釋 2 ppb
飼料三氯yi酸提取 2 ppb

4、試劑盒保存
2-8℃暗處保存
使用前應先將試劑平衡至室溫，再重組或稀釋試劑盒組分。
應避免陽光對色原底物溶液的直接照射。
若觀察到下列現象，便說明試劑已發生降解:
色原溶液在諸如反應孔以前變藍。
z高結合時顏色反應微弱或缺如。（零標準，E450 nm<0.8）

5、慶大霉素檢測試劑盒試劑盒組分
96孔酶標版（12條*8孔）預包被抗體，無需洗滌
樣品稀釋液：20ml，50倍濃縮
洗滌緩沖液：50ml，20倍濃縮
底物溶液緩沖液A：7ml，即時可用
底物溶液B：7ml，即時可用
終止液：7ml，即時可用
酶結合物溶液：7ml，即時可用
6瓶慶大霉素標準溶液：各1ml，濃度為0、0.1、0.3、0.9、2.7和8.1ng/ml
檢測所需設備和材料：
酶標儀（450nm）：冷凍離心機；混合振蕩器；移液器；勻質器；微量移液器（20-200ul,100-1000ul）;移液器（205ml）；天平、量筒、塑料檢測管、鋁箔或封口膜

6、注意事項
終止溶液含硫酸，切勿接觸皮膚。
全部生物材料勻應避免接觸皮膚和粘膜。
底物TMB在接觸皮膚和吞入時有吸入毒性，在處理此種底物時應小心謹慎。
不得失效期后的試劑盒組分，也不得混合使用不同批次的組分。
各板孔z后均用于測定光學曲線，應防止孔底內外遭受污損。
全部組分均在使用前*溶解，應特別注意底物，此化合物可在4℃時結晶。

7、樣品處理
7.1 牛奶
2000g，4℃離心10min
去除上層脂肪
講脫脂奶樣用樣品稀釋液10被系數，充分混勻，調ph值為7.4±0.4
吸取50ul用于檢測。
7.2 組織
取1g均質組織樣品（肉，肝或腎），加入3ml 3%的三氯yi酸，均質1min，顛倒混勻樣品30min;
離心（2000g,4℃ 10min）；
除去上層脂肪,吸取200ul清液，加入800ul樣品稀釋液，混勻；
調整PH值到7.4±0.4；
吸取50ul用于檢測。
7.3 血清
血清用樣品稀釋液稀釋20倍后使用
吸取50ul用于檢測
7.4蜂蜜
7.4.1 緩沖液稀釋
城區1g均質的蜂蜜樣品于塑料試管中
加4ml樣品稀釋液，渦旋混合均勻
靜置一會分層，吸取1ml上層干凈液體加到4ml樣品稀釋液中，渦旋混合均勻。
吸取50ul用于檢測
7.4.2 抽提法
1g蜂蜜樣品中加9ml抽提緩沖液
室溫下混合10min，離心（2000g,10min）
Sep-pakC18柱（water公司，05910）依次用10ml去離子水、5ml甲醇、10ml去離子水活化柱子。
將5ml樣品上清液過柱，用5ml去離子水洗滌柱子
真空干柱
用1ml甲醇洗脫
40℃ 氮硫蒸發甲醇
樣品殘留物溶于5ml樣品稀釋液
吸取50ul用于檢測
7.5 蛋類樣品
均質后的全蛋、蛋白或蛋黃
吸取1ml均質后的樣品到干凈試管中
加9ml樣品稀釋液，渦旋混合均勻
吸取50ul用于檢測
7.6 尿樣
將尿樣用樣品稀釋液稀釋10被倍，充分混勻，調PH值為7.4±0.4
吸取50ul用于檢測
7.7 飼料樣品
稱取1g均質的飼料樣品，加5ml3%的三氯yi酸溶液，均質1min，顛倒混勻樣品30min;
去掉塞子，離心（2000g,10min）
出去上層脂肪，用過濾管吸取100ul清液（避免吸入脂肪）于塑料試管中，加入900ul樣品稀釋液后，混勻；
調整PH到7.4±0.4
吸取50ul用于檢測

8.慶大霉素檢測試劑盒試劑制備
使用之前應先將試劑盒回復至室溫20-25℃（提前15-30min從冰箱去除即可）
8.1 微孔板
剪開塑料袋，取出需用數量的微孔板及框架。將不用的微孔板條放回備有干燥機的塑料袋內，密封保存于2-8℃。
8.2洗滌緩沖液（20*濃縮）
稀釋的洗滌緩沖液應在臨用時現配。如：2ml濃縮的洗滌緩沖液 38ml蒸餾水
8.3 樣品稀釋緩沖液（10*濃縮）
稀釋液應在臨用時現配。如：2ml濃縮的洗滌緩沖液 18ml蒸餾水
8.4 底物溶液
使用前恢復至室溫，避免陽光直射，用前充分搖勻（底物溶液在4℃
下易結晶）。
8.5 蜂蜜抽提緩沖液
10.1g（50Mm）1-庚烷磺酸（sigmaH27660）,11.4g（30mM）Na3PO4·12H2O.用去離子水定容到1升。（用Na3PO4 調PH2.0）

9、慶大霉素檢測試劑盒檢測步驟（室溫20-25℃下操作z佳）
9.1 將所需數量的孔條插入微孔架
9.2 每孔從底部先加入50ul標準品或已處理好的樣品，再分別加入50ul酶結合物于相應孔中
9.3封板，搖板1min
9.4 37（±1℃）孵育30min
9.5 洗版：將微滴板上端朝下倒空各孔后，再平穩快速向下垂直甩動，并將微孔架倒置在吸水紙上拍打以除去孔中的液體。用洗滌緩沖液（300ul/孔）注入全部板孔，再次倒掉微孔中液體。重復上述操作3遍。如使用自動洗板機，可預定洗板完成5次周期。
9.6 將100ul混合后的底物溶液加入各孔。37℃暗處溫育10min。
9.7 將50ul終止液加入各孔，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450nm/630nm檢測），測定每孔OD值。

10、慶大霉素檢測試劑盒結果判定
1.計算各標準品（或樣品）的百分吸光度值，按下式計算：
標準品或樣品O.D
*100%=各標準品（或樣品）吸光度值%
零標準O.D
2.繪制以各標準品慶大霉素濃度為半對數坐標系統的曲線圖，即縱坐標標書標準百分吸光值，橫坐標表示各標準品慶大霉素濃度（ng/ml）的對數。在含量0.1-8.1ng/g范圍內標準曲線應為線性。
3.各樣品濃度可根據其百分吸光度值，從標準曲線上讀出，并乘以相應的稀釋系數.
樣品稀釋倍數慶大霉素的實際濃度
牛奶 10 校正曲線上讀出的濃度值*10
組織 20 校正曲線上讀出的濃度值*20
血清 20 校正曲線上讀出的濃度值*20
蛋類 10 校正曲線上讀出的濃度值*10
蜂蜜（稀釋法） 25 校正曲線上讀出的濃度值*25
蜂蜜（抽提法） 1 校正曲線上讀出的濃度值*1
尿樣 10 校正曲線上讀出的濃度值*10
飼料 50 校正曲線上讀出的濃度值*50


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